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蘭花的組織培養

組織培養是先進的無性繁殖方法。 取用植物器官或組織的一小部分, 脫離母體而加以培養, 經過誘導和分化, 使它再生成獨立的新植株。 也稱為外植體培養。

早在1902年, 德國植物學家哈巴蘭特(Haberlandt)預言:“植物細胞具有全能性, 每個細胞都像胚胎細胞那樣, 可以經過體外培養成為一個完整的植株。 ”在這個假說指引下, 法國科學家戈第勒(Gautheret)和諾貝庫特(Nobecourt)用小塊的胡蘿蔔根, 于1938年成功地在試管中用培養基培養出愈傷組織。 1939年, 美國科學家懷特(White)用煙草莖段形成層進行組織培養和繼代培養,

也獲得成功。 他們的工作為植物細胞和組織培養技術的發展奠定了基礎。 1949年, 美國斯庫格(Skooog)等又從愈傷組織中分化出幼苗來, 培養出了真正的試管植物。 從此之後, 組織培養的技術, 不斷創新改進, 在實驗上和應用上都獲得日新月異的進展。
蘭花的莖尖組織培養, 最早是法國人葛雷爾(Morel)在1960年獲得成功的。 他利用莖尖培養的目的是想除去蘭屬植物上的病毒, 他得到了無病毒的幼苗。 他發現蘭屬莖尖培養, 可逐漸增大而形成類原球莖體, 與蘭花胚胎正常發育相似、經過分割, 重複培養可以大量增殖、按照理論計算, l個外植體在1年之內可產生400萬株苗之多。 從此, 組織培養技術被應用于蘭花的繁殖, 刀多年來形成了蘭花的工廠化、商品化的生產。

目前, 蘭花的各個部位, 各個器官, 即根、莖、葉、芽、花序、幼胚等都可以作為外植體進行培養。
組織培養要有必要的設備和比較高的技術措施。 首先要有培養室、無菌接種室及各種培養用具、用品等。 在培養時要先配製培養基, 剝取外植體, 然後消毒、接種、轉移, 最後試管苗移植等, 都需要比較複雜和細緻的技術。 現將組織培養的方法簡介如下。
(一)培養基的配製
培養基是用各種不同成分和劑量的元素, 加上各種維生素、激素等製成。 蘭花種類不同, 培養基的成分也有所不同。 大多數的培養基是用固體或半固體的, 也有用液體培養的, 在液體中培養則需特殊的通氣方法, 如常用的離心機或轉動機,

不停地將培養基轉動。
培養基須包括礦物質、糖、維生素及生長激素。 在實際中用得最多的是MS培養基, 或在此基礎上加添少數激素。 MS培養基( Murashige and Skoog basic medium)的成分如下:
成分 用量(mg)
NH4NO3硝酸銨 400
Ca(NO3)2•4H2O硝酸鈣 144
KNO3硝酸鉀 80
KH2PO4磷酸二氫鉀 125
MgSO4 •7H2O硫酸鎂 72
KCL氯化鉀 65
NaFe—EDTA螫合鐵 25
H3BO3硼酸 16
MnSO4 •4H2O硫酸錳 65
ZnSO4• 7H2O硫酸鋅 27
KI碘化鉀 0.75
IAA吲跺乙酸 2
Kinetin激動素 0.04—0.2
Thiamin維生素B1 0.1
Nicotinicacid煙酸 0.5
Pyridoxine維生素B6 0.5
Glycine甘氯酸 2
Myo—inositol肌醇 100
Casein—hydrolysate水解酪蛋白 1000
Sugar蔗糖 2%
瓊脂(洋菜) l%
蒸餾水 1000ml
PH值為5.0-6.0

配製培養基要在實驗室內進行, 各種用具、玻璃瓶或試管, 都要嚴格消毒殺菌。 最後配成的培養液注入玻璃瓶或試管內, 再進行消毒, 冷卻後接入蘭花外植體。 接種工作應在無菌接種室或超淨工作臺上完成。

(二)接種方法
1採取莖尖
蘭屬植物的組織培養以莖尖為最常用的材料。 莖尖是分生組織最為活躍的生長點。

選擇健壯植株, 將外層的葉和鞘葉剝去, 把整個莖尖切下, 浸入 2.5%的漂白粉溶液或7%的次氯酸鈉溶液中15—20分鐘。 然後取出用蒸餾水沖洗5—6次, 將消毒液沖洗十淨。 在顯微鏡或擴大鏡下將莖尖的生長點挑出, 並即刻接種到玻璃管培養基上。

2. 培養原球體

生長點一般經過4-6周的培養, 產生出小而圓的原球體。 將原球體取出, 重新分切, l分為4, 再入培養基內培養, 經l—2個月又可長出原球體。 同樣, 再行分割;重新培養。 在幾個月之內, 就會獲得大量的原球體。

3分化培養

把切割的原球體放在液體培養基中, 放在旋轉培養床上進行旋轉培養。 當其小塊組織稍為長大後, 轉接在分化的培養基上, 讓它分化根和芽。

4 . 試管苗移植

當原球體組織分化根和芽, 逐漸長大之後, 就成為幼小植株。 經一段培養, 生長到一定程度就應該從玻璃瓶或試管中取出, 移植到土壤或基質中了。 移出試管後, 用自來水將根上的培養基輕輕沖洗乾淨。 栽培基質一般用水苔或蛭石。 栽植後移入溫室內培養。

在組織培養中要經過兩個關:第一個關是分化培養基的生長激素和劑量, 能否分化根和芽, 完全取決於它。 用什麼激素和什麼劑量, 每種蘭花都不一樣, 要經過摸索試驗才能掌握。 可以設計幾種配方, 進行對比實驗來確定。 第二個關是試管苗移出瓶後, 往往不適應外界環境而大批死亡。 要創造良好條件, 在精心管理之下, 才能獲得良好結果。

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