大壁虎棲息在山岩或荒野的岩石縫隙、石洞或樹洞內, 有時也在人們住宅的屋簷、牆壁附近活動。 聽力較強, 但白天視力較差, 怕強光刺激, 瞳孔經常閉合成一條垂直的狹縫。 夜間出來活動和覓食, 瞳孔可以擴大4倍, 視力增強, 靈巧的舌還能伸出口外, 偶爾舔掉眼睛表面上的灰塵。 大壁虎的動作敏捷, 爬行的時候頭部離開地面, 身體後部隨著四肢左右交互地扭動前進, 腳底的吸附能力很強, 能在牆壁上爬行自如。
原來認為大壁虎的腳下有吸盤, 其實其趾端膨大的足墊並不是吸盤,
大壁虎主要捕食蝗蟲、蟑螂、土鼈、蜻蜓、蛾、蟋蟀等昆蟲及幼蟲, 偶爾也吃其他蜥蜴和小鳥等, 咬住東西往往不松嘴。 大壁虎的尾巴易斷, 但能再生, 這是由於尾椎骨中有一個光滑的關節面, 把前後半個尾椎骨連接起來, 這個地方的肌肉、皮膚、鱗片都比較薄而鬆懈, 所以在尾巴受到攻擊時就可以劇烈地擺動身體, 通過尾部肌肉強有力的收縮, 造成尾椎骨在關節面處發生斷裂, 以此來逃避敵害。 由於尾巴是以糖原的形式而不是單純以脂肪的形式貯存能量,
大壁虎斷尾以後, 自殘面的傷口很快就會癒合, 形成一個尾芽基, 經過一段細胞分裂增長時期, 然後轉入形成鱗片的分化階段, 最後長出一條嶄新的再生尾, 但與原來的尾巴相比, 顯得短而粗。 不過, 大壁虎只有在迫不得已的時候才會斷尾, 因為斷尾畢竟是它身體上所受的嚴重損傷, 不僅失去了尾巴上儲存的脂肪, 而且還因此而失去了它在同類中的地位。 尤其是在求偶時,