血塗片的製作及應用
血常規是醫院常作的檢查項目,但是由於大部分的醫院用的都是三分類的血球儀(五分類血球儀價格太高),在分析上存在一定的缺陷,而血塗片則能在一定程度上很好的補償,使得三分類的血球儀也能起到五分類的效果。而且血塗片的作用還不僅於此,它還能更直觀的放映細胞的形態,以及血液的一種狀態。現在就血塗片的製作和應用做一個介紹。
血塗片的製作:
血塗片的製作方法很多,但需要的材料也都是一樣的,載玻片和(或)蓋玻片。現在介紹一種我們醫院常用的塗片方法:
1、首先左手持一載玻片,將采到的血(做血常規剩下的血)滴一滴到載玻片一端:
血塗片
2、右手持一蓋玻片作為推片,成30-45度角于血滴前方靠近血滴
血塗片
3、右手移動蓋玻片使其一端與血液接觸
血塗片
4、右手持蓋玻片往前推動,速度不能太慢,保證血液均勻的被推開
血塗片
5、做好的血塗片
血塗片
5、血塗片做好後需要風乾,之後就可以進行染色,儘管每個醫院所用染色液可能不一樣,但基本的方法都一致,也可以根據染色液的說明進行具體操作,我們醫院用的是diff-quick染液。
染好的片子就需要在顯微鏡下觀察,一般我們會從低倍鏡開始觀察,再逐次轉換為高倍鏡甚至油鏡。
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細胞分類計數器
一般情況下,我們會在顯微鏡下找到一個合適的視野開始計數,按照一定的方向順序來數白細胞,而這個視野的選著會很重要,在做血塗片的時候血塗片上通常會有三條帶,中間的那一條帶就是我們觀察的區域,鏡下會顯示細胞既不重疊也不太稀疏。然後我們會把數的100個白細胞記錄下來並分類,並分別記下各類細胞所占的比例。
細胞分類計數器
(細胞分類計數器)
通過這樣的方法,我們就可以得到白細胞下各個種類的比例,結合血常規的白細胞數目就可以得到一個五分類的項目,這對於分析動物的身體狀況更加的全面和科學。如上圖的結果是:嗜中性粒細胞百分比:70%(分葉:57%,杆狀:13%);淋巴性細胞百分比:25%;單核細胞百分比:3%;嗜酸性粒細胞百分比:2%;嗜鹼性粒細胞百分比:0。
再簡單舉例說一下血塗片在臨床上的應用,也是結合血常規的分析。如下圖為一隻犬的血常規結果:
從結果上看,RBC(紅細胞)下降,HGB(血紅蛋白)下降,HCT(紅細胞壓積)下降。很明顯的可以判定為貧血。但是貧血也分很多種的,到底是否為再生性,又或者是否是出血或溶血造成的。然後根據血塗片可以知道:
從該血塗片我們可以看到,紅細胞中間淡然區明顯擴大,說明了這是正紅細胞低色素性貧血,也就是由於缺鐵性貧血,需要補充鐵元素,增強營養。一方面我們知道動物的具體情況,可以針對性的説明解決問題。
當然,血塗片在臨床上的作用不僅僅如此,我們不僅可以用來來計數分類白細胞,還可以觀察紅細胞的形態來判斷如果出現異性紅細胞的原因,白細胞形態異常的原因,還可以看到血液寄生蟲如:巴貝斯焦蟲,血吸蟲的微絲蚴。而且對於血常規儀器還可以起到一種驗證的作用,就是說如果血常規的結果與你在顯微鏡下看到的結果出入較大的時候,如果你保證你血塗片的製作和觀察都沒問題的話,就要懷疑機器的判讀有問題了。比喻抽血過程比較慢,導致血凝的出現而使得機器讀書的血小板極低,以及由於貓的血小板和紅細胞體積較近而出現的判讀等都可以用血塗片來糾正和驗證。